艱難梭菌毒素A+B抗原檢測(cè) ELISA操作孵育過(guò)程常見(jiàn)問(wèn)題及解答
1） 孵育時(shí)未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗*；
2） 孵育時(shí)間人為延長(zhǎng)，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周?chē)?，難以清洗*。 3）孵育溫度未按照說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行，溫度過(guò)高或過(guò)低；
解決辦法：
1） 貼封片或加蓋；
2） 按說(shuō)明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間和孵育溫度。 通用名稱(chēng)：艱難梭菌毒素A+B抗原檢測(cè)
英文名稱(chēng)：C. difficile toxin A+B antigen detection
公司品牌：德國(guó)DRG
儲(chǔ)存條件：2-8℃
檢測(cè)方法：ELISA方法
預(yù)期用途：用于定性檢測(cè)糞便和細(xì)胞上清液中的艱難梭菌毒素A+B抗原。
參考價(jià)格：詢(xún)價(jià)
產(chǎn)品貨號(hào)：EIA-4448
產(chǎn)品規(guī)格：96T
檢測(cè)樣本：糞便、細(xì)胞上清液
供應(yīng)商家：深圳市科潤(rùn)達(dá)生物工程有限公司
艱難梭菌毒素A+B抗原檢測(cè)試劑盒預(yù)期用途
艱難梭菌毒素A+B抗原檢測(cè)僅用于體外檢測(cè)，定性檢測(cè)糞便和細(xì)胞上清液中的艱難梭菌毒素A+B抗原。
艱難梭菌簡(jiǎn)介
艱難梭菌是人類(lèi)腸道內(nèi)的正常菌群，如果過(guò)度服用抗生素，艱難梭菌就會(huì)變成致病菌。Hall 和 O’Toole在1935年將此菌分類(lèi)到了可產(chǎn)生毒素的菌群中。艱難梭菌的毒素株會(huì)產(chǎn)生兩類(lèi)毒素：毒素A，腸毒素；毒素B，細(xì)胞毒素。直到1970后期，人們發(fā)現(xiàn)了艱難梭菌與偽膜性腸炎有所關(guān)聯(lián)時(shí)才確定艱難梭菌是致病菌。偽膜性腸炎是一類(lèi)與抗生素相關(guān)聯(lián)的疾病，主要發(fā)生腹瀉和急性粘膜壞死性炎癥，從而形成由纖維蛋白、粘液層、壞死上皮細(xì)胞和白血球構(gòu)成的克隆偽膜性腸炎。
盡管在50%多的無(wú)癥狀克隆嬰兒患者的糞便中發(fā)現(xiàn)了艱難梭菌毒素，而且還有高濃度的毒素A和毒素B，但是只有少數(shù)會(huì)最終患有PMC（偽膜性腸炎），剩余的都是無(wú)癥狀的。對(duì)于這種現(xiàn)象可能的原因包括：母乳能夠中和毒素A和毒素B，胎兒腸細(xì)胞對(duì)毒素A的敏感度降低，或者是缺乏毒素受體。少數(shù)病例顯示，囊性纖維變性患者對(duì)PMC（偽膜性腸炎）敏感度降低。診斷抗生素與結(jié)腸炎相關(guān)的普遍的臨床方法是細(xì)胞培養(yǎng)和乳膠凝集試驗(yàn)。
細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)可以發(fā)現(xiàn)毒素B對(duì)細(xì)胞的一個(gè)影響作用，這個(gè)試驗(yàn)的敏感度很高（50pg/ml毒素B），但是最少也要2天才可以完成。乳膠凝集是一種可以通過(guò)糞便來(lái)篩查出與艱難梭菌相關(guān)聯(lián)的蛋白質(zhì)的方法，即使交叉反應(yīng)和不會(huì)產(chǎn)生毒素的艱難梭菌也會(huì)被檢測(cè)出來(lái)。很多研究者已表明酶聯(lián)免疫法可以檢測(cè)出1-10ng/ml的毒素A或是毒素B。
艱難梭菌毒素A+B抗原檢測(cè)原理
檢測(cè)糞便中的艱難梭菌毒素A+B抗原利用的是夾心法。糞便或者細(xì)胞上清液中的艱難梭菌和陽(yáng)性質(zhì)控與包被孔中的單克隆抗毒素A和B抗體反應(yīng)，溫育后，未連接的成分被洗滌除去。然后在第二次溫育中連接到包被孔的毒素會(huì)特異性地與生物素化的多克隆抗毒素A和B抗體反應(yīng)，未連接的材料會(huì)被洗滌除去。
在下一步的溫育中，辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素會(huì)與生物素化的抗體反應(yīng)，經(jīng)洗滌步驟除去未連接酶聯(lián)物。然后加入底物顯色液TMB，顯藍(lán)色，加入終止液終止反應(yīng)，溶液由藍(lán)色變成了黃色。在酶標(biāo)儀上讀取吸光度，吸光度直接與艱難梭菌毒素A和B的量成正比例。經(jīng)與臨界值比較，可以判定結(jié)果為陽(yáng)性或者陰性。
艱難梭菌毒素A+B抗原檢測(cè)試劑盒組成 | 名稱(chēng) | 描述 | 標(biāo)志 | | 反應(yīng)板 | 含有抗艱難梭菌毒素A+B抗體的96孔板 | MT PLATE | | 濃縮洗滌液 (10X) | 100 ml濃縮緩沖液（10倍濃縮），可稀釋至1000ml。白蓋 | WASH BUF | | 樣本稀釋液 | 100ml，即用，紅色，黑蓋 | DIL | | 陽(yáng)性質(zhì)控品 | 2 ml 艱難梭菌陽(yáng)性樣本，即用，藍(lán)色，黑蓋 | CONTROL + | | 陰性質(zhì)控品 | 2ml 艱難梭菌陰性樣本，即用，藍(lán)色，綠蓋 | CONTROL – | | 生物素化的抗體 | 生物素化的多克隆抗毒素A和B抗體（兔）
15 ml，即用，綠色，白蓋 | CONJ BIOTIN | | 酶聯(lián)物 | 15ml鏈霉親和素標(biāo)記的辣根Catalase，即用，紅色，棕色蓋 | CONJ STREPT | | 顯色液 | 15 ml TMB顯色和hydrogen peroxide，即用，藍(lán)蓋 | SUBS TMB | | 終止液 | 15 ml 0.25 M流酸，即用，黃蓋 | SOLN |
艱難梭菌毒素A+B抗原檢測(cè)試劑的制備和保存
各成分的有效期見(jiàn)于各自的標(biāo)簽，完整的試劑盒有效期見(jiàn)于盒子標(biāo)簽。收到試劑盒后，放在原始的試劑盒箱子里于2-8℃保存。所有的成分開(kāi)瓶后，在適當(dāng)?shù)谋４鏃l件下，至少可以穩(wěn)定2個(gè)月。稀釋后的洗滌緩沖液在2-8℃，至少可以保存1個(gè)月。
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