HMGB1試劑盒（ELISA法）
通用名稱：人高遷移率族蛋白檢測試劑盒（ELISA法）
英文名稱：HMGB1 ELISA
產(chǎn)品規(guī)格：96T
產(chǎn)品貨號(hào)：ST51011
產(chǎn)品品牌：德國IBL
HMGB1試劑盒預(yù)期用途
HMGB1試劑盒可用于定量測定人血清和血漿中的HMGB1含量。此外，該試劑盒可用于來自牛，豬，兔，小鼠和大鼠的血清，血漿和腦脊液（CSF）的研究。也可以檢測細(xì)胞培養(yǎng)基和BALF（支氣管肺泡液）。
前言簡介
HMGB1是大約30kDa的蛋白質(zhì)，是非組蛋白核蛋白組的主要成分。HMGB1（高遷移族Box1蛋白）是轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，通常存在于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中。 HMGB1在惡性疾病等疾病的發(fā)病機(jī)理中起重要作用。在腫瘤的情況下，細(xì)胞的氧供應(yīng)可以斷開。 這導(dǎo)致細(xì)胞死亡（壞死）和釋放HMGB1，進(jìn)而導(dǎo)致在相鄰腫瘤環(huán)境中形成朝向腫瘤的血管生成。這些血管確保腫瘤的存活和進(jìn)一步的生長。 體外研究表明，通過定量測定HMGB1濃度，可以區(qū)分病理性細(xì)胞死亡（壞死）和生理細(xì)胞死亡（細(xì)胞凋亡）。在壞死中觀察到更高的HMGB1值。HMGB1在膿毒性休克后期也起重要作用。 結(jié)果表明，即使在膿毒性休克后期，HMGB1在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中的抑制顯著提高了嚙齒動(dòng)物的存活率。HMGB1通過與RAGE（“晚期糖基化終產(chǎn)物的受體”）結(jié)合起作用，具有與細(xì)胞因子TNF-α和IL-6相似的促炎作用。 膿毒癥患者血清中也可見高值。血液中的HMGB1濃度在許多其他疾病中也增加，包括類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA）急性肺損傷（ALI）和彌散性血管內(nèi)凝血（DIC）。HMGB1 ELISA由Ikuro Maruyama博士和Shino-Test Corporation（日本）開發(fā)。本產(chǎn)品由Shino-Test公司*的IBL制造。
HMGB1試劑盒檢測原理
HMGB1試劑盒是用于定量測定血清和血漿中HMGB1的夾心酶免疫測定。 微量滴定板孔用純化的抗HMGB1抗體包被。樣品中的HMGB1特異性結(jié)合固相的抗體，并被第二個(gè)酶標(biāo)記的抗體識(shí)別。底物反應(yīng)后，HMGB1濃度由顏色強(qiáng)度決定。
HMGB1試劑盒組成成分
| 數(shù)量 | 標(biāo)簽 | 組成 | | 1 x 12 x 8 | MTP | 微孔板可拆卸，包被有抗HMGB1多克隆抗體 | | 1 x | ENZCONJ LYO | 酶標(biāo)記物 凍干粉含有與過氧化物酶結(jié)合的HMGB1，2 。 | | 1 x | CAL LYO | 標(biāo)準(zhǔn)品 凍干粉含有豬HMGB1 ，稀釋見章節(jié)10.1 | | 1 x | CONTROL+ LYO | 陽性質(zhì)控 凍干粉含有豬HMGB1 ，稀釋見章節(jié)10.1 | | 1 x 20 mL | DILBUF | 稀釋液即用型，含有：緩沖液，0.01 % NaN3. | | 1 x 12 mL | ENZCONJ DIL | 酶標(biāo)記物稀釋液即用型，含有：緩沖液 | | 2 x 100 mL | WASHBUF CONC | 洗滌液 5X濃縮含有：磷酸鹽緩沖液，<0.5 %Tween 20. | | 1 x 6 mL | COLREA A | 底物液A即用型。 | | 1 x 6 mL | COLREA B | 底物液B即用型 | | 1 x 12 mL | COLOUR STOP | 終止液即用型，含有：0.35M硫酸 | | 2 x | FOIL | 蓋板膜 |
所需材料（未提供）
1. 微量移液器（Multipette Eppendorf或類似設(shè)備，CV <3％）。 體積：10; 20; 100; 100-1000μL
2. 渦街?jǐn)嚢铏C(jī)
3. 軌道搖床（500 rpm）
4. 8通道微量移液器
5. 洗瓶，自動(dòng)或半自動(dòng)微量滴定板清洗系統(tǒng)
6. 能夠讀取450nm吸光度的酶標(biāo)儀（參考波長600-650nm）
7. 雙蒸水或去離子水
8. 紙巾，吸頭和定時(shí)器
9. 聚苯乙烯（PS）或聚丙烯（PP）管用于標(biāo)準(zhǔn)和樣品稀釋
10. + 37°C和+ 25°C孵育箱
儲(chǔ)存條件
HMGB1試劑盒在環(huán)境溫度下運(yùn)輸，儲(chǔ)存應(yīng)在2-8°C。 遠(yuǎn)離熱源或陽光直射。 樣品和制備的試劑的儲(chǔ)存和穩(wěn)定性在相應(yīng)的章節(jié)中有描述。開封的微量滴定板條在試劑盒的有效期限內(nèi)保持穩(wěn)定，但應(yīng)在密封的袋子中儲(chǔ)存在2-8°C。
HMGB1試劑盒檢測步驟
| 1 | 分別加入100ul稀釋液到相應(yīng)的板孔中。 | | 2 | 分別加入10ul稀釋液到板中的空白孔。 | | 3 | 分別加入10ul標(biāo)準(zhǔn)品，陽性質(zhì)控及血清或血漿樣本到相應(yīng)的孔中，短暫搖動(dòng)30s。 | | 4 | 用蓋板膜蓋板，在+37℃溫育20-24h。 | | 5 | 移去蓋板膜，棄去溶液，用稀釋好的洗滌液400ul/孔洗滌板孔5次，用吸水紙拍干多余的液體。 | | 6 | 每孔加入100ul酶標(biāo)記物。 | | 7 | 蓋板膜蓋板，+25℃溫育2 h。 | | 8 | 移去蓋板膜，棄去溶液，用稀釋好的洗滌液400ul/孔洗滌板孔5次，用吸水紙拍干多余的液體。 | | 9 | 為了添加顯色液和終止液，如果有的話，可以使用8通道微量移液器。移液應(yīng)在底物液和終止液加液時(shí)的相同時(shí)間間隔內(nèi)進(jìn)行。使用正位移并避免形成氣泡 | | 10 | 每孔 加入100ul顯色液。 | | 11 | 室溫(18-25°C)孵育30min。 | | 12 | 每孔加入100ul終止液終止反應(yīng)，將內(nèi)容物輕輕混合搖勻。 | | 13 | 清理板孔背面。 小心不要?jiǎng)潅蹇?，因?yàn)檫@可能會(huì)干擾測量。 | | 14 | 60min內(nèi)在450nm（參考波長600-650nm）處讀取吸光度值。 |
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