骨骼肌受體酪氨酸激酶自身抗體檢測試劑盒 科潤達(dá)生物提供的德國IBL品牌的骨骼肌受體酪氨酸激酶自身抗體檢測試劑盒，簡寫為musk試劑盒。本次介紹的musk試劑盒是采用酶聯(lián)免疫法，該方法操作簡單方便，有較高的靈敏度和特異性強的特征，能準(zhǔn)確的檢測出陰性陽性結(jié)果，并且?guī)в?6孔的可拆卸包被板，能夠節(jié)省很多時間成本。ELISA方法也普遍應(yīng)用于科研當(dāng)中。 此外科潤達(dá)生物還提供部分試劑盒的代測服務(wù)，歡迎咨詢了解。 通用名稱：骨骼肌受體酪氨酸激酶自身抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法） 英文名稱：MuSK-Ab ELISA 產(chǎn)品規(guī)格：96T 產(chǎn)品貨號：RE51021 產(chǎn)品品牌：德國IBL musk試劑盒預(yù)期用途 musk試劑盒可定性和定量檢測人血清中抗骨骼肌受體酪氨酸激酶自身抗體。僅用于科研使用。 前言簡介 重癥肌無力（MG）是由于自身抗體作用使神經(jīng)肌肉傳遞失敗而導(dǎo)致的。大約80—90%的廣義MG病人均有肌肉煙堿型乙酰膽堿受體的自身抗體。這些抗體會導(dǎo)致乙酰膽堿受體數(shù)量減少和功能的喪失，并導(dǎo)致神經(jīng)肌肉傳遞失敗—肌無力。10—20%的廣義重癥肌無力病人和多達(dá)50%的眼肌型重癥肌無力患者無法檢測到乙酰膽堿受體抗體。這種情況通常被稱為血清反應(yīng)陰性的重癥肌無力。血清反應(yīng)陰性的重癥肌無力已被認(rèn)為是一種抗體介導(dǎo)的疾病。 骨骼肌特異性受體酪氨酸激酶抗體（MuSK-Ab）已證實存在于廣義的血清反應(yīng)陰性的重癥肌無力病人的血清中（大約40%血清反應(yīng)陰性的MG病人）。MuSK是一種集聚蛋白受體復(fù)合物的一部分并且在突觸形成過程中誘導(dǎo)乙酸膽堿受體的聚集，而且Musk也在成熟神經(jīng)肌肉接點（NMJ）表達(dá)。Musk MG病人大多數(shù)為女性，有顯著的頭顱和累及延髓與其他形式的MG相比會有更高的風(fēng)險。疾病的發(fā)作往往在早期，大多數(shù)病人在30-40歲出現(xiàn)癥狀。檢測MuSK抗體非常有助于診斷和臨床管理MG病人。 musk試劑盒檢測原理 musk試劑盒是利用固相酶聯(lián)免疫吸附檢測試驗（ELISA）。包被孔中包被了抗原。病人樣本中的抗體連結(jié)到包被孔中的抗原，并通過信號放大系統(tǒng)檢測出來。顯色反應(yīng)是通過結(jié)合到抗體的堿性磷酸酶催化的。生成的顏色強度與樣本中相應(yīng)抗體濃度成正比關(guān)系。定性或者定量結(jié)果分別通過臨界質(zhì)控或者標(biāo)準(zhǔn)曲線得到。 musk試劑盒組成成分 名稱 | 數(shù)量 | 成分 | | 微孔板 | 12×8 | 包被有高度純化的重組MuSK蛋白 | | 酶聯(lián)物 | 1×0.25ml | 含堿性磷酸酶標(biāo)記的特異性抗體 | | 抗血清 | 1×13ml | 含抗人免疫球蛋白、穩(wěn)定劑 | | 標(biāo)準(zhǔn)品A~E | 5×12ml | 即用型 濃度0、0.4、2.5、5、12U/ml | | 陽性質(zhì)控 | 1×1.2ml | 紅色 即用型 | | 陰性質(zhì)控 | 1×1.2ml | 綠色 即用型 | | 分析緩沖液 | 1×120ml | 紅色 即用型 | | 洗滌液 | 1×100ml | 10倍濃縮 | | 底物液 | 1×13ml | 即用型 | | 終止液 | 1×15ml | 含1M NaOH、0.25M EDTA |
需要的材料（未提供） 1) 移液器，體積5、10、20、50、100、1000μL 2) 一次性的玻璃管(12×75 mm) 3) 聚丙烯（PP）管（例如Sarstedt） 4) 旋渦混合器 5) 溫育箱，37℃ 6) 8通道的移液器，帶加樣槽 7) 洗瓶、自動或者半自動洗板機 8) 酶標(biāo)儀 9) 雙蒸水或去離子水 10) 吸水紙、吸嘴和秒表 儲存條件 musk試劑盒和運輸環(huán)境和儲存環(huán)境溫度為2-8℃，避免熱源或太陽直射。樣品的儲存與穩(wěn)定性及試劑的準(zhǔn)備將在相關(guān)章節(jié)中闡述。開封的試劑盒在有效期內(nèi)穩(wěn)定，前提是要將試劑盒用袋子密封并儲存于2-8℃的環(huán)境下。 樣本要求 血清 遵從靜脈穿刺采集全血的常規(guī)注意事項。從采集血液樣品的那一刻起到檢測時都應(yīng)保持血液樣品的化學(xué)整體性。不要使用明顯溶血、黃疸血和脂血樣品。如果樣品出現(xiàn)混濁，則在實驗前應(yīng)當(dāng)離心以除去所有的微粒物質(zhì)。 保存 | 2-8℃ | ≤ -20℃（分裝） | 避免熱源或太陽直射，避免反復(fù)凍融 | 穩(wěn)定性 | 7天 | 6個月 |
檢測方法 凍干或者濃縮成分的制備 體積 | 成分 | | 稀釋液 | 比例 | 備注 | 保存 | 穩(wěn)定性 | 20ml | 濃縮洗滌液 | 180 mL | 雙蒸水 | 1:10 | 充分混勻 | 2-8℃ | 4周 | 40 μL | 酶聯(lián)物 | 4 mL | 分析緩沖液 | 1:101 | 混勻，避免氣泡 | 2-8℃ | 48小時 |
樣本的稀釋 病人樣本 | 稀釋 | 稀釋液 | 比例 | 備注 | 血清 | 常規(guī) | 分析緩沖液 | 1:101 | 例如：10μL血清樣本+1000μL分析緩沖液 |
musk試劑盒檢測步驟 1、移取100μL的標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和稀釋的病人樣本至相應(yīng)的微孔中，蓋板 2、在定軌搖床上（500rpm）室溫（18-25℃）溫育60分鐘 3、棄去孔中溶液。使用稀釋的洗滌液每次250μL洗板3次，在吸水紙上拍干 4、每孔加入100μL抗血清，蓋板 5、在定軌搖床上（500rpm）室溫（18-25℃）溫育60分鐘 6、棄去孔中溶液。使用稀釋的洗滌液每次250μL洗板3次，在吸水紙上拍干 7、每孔加入100μL已稀釋的酶聯(lián)物，蓋板 8、在定軌搖床上（500rpm）室溫（18-25℃）溫育60分鐘 9、棄去孔中溶液。使用稀釋的洗滌液每次250μL洗板3次。在吸水紙上拍干 10、加底物液和終止液建議使用8通道移液器。移取底物液和終止液應(yīng)該為相同的時間間隔。避免氣泡的生成 11、每孔加入100μLPNPP底物液。輕輕搖動酶標(biāo)板混勻溶液 12、在室溫（18-25℃）溫育30分鐘 13、每孔加入100μL PNPP終止液終止顯色反應(yīng)。輕輕搖動酶標(biāo)板混勻溶液 14、在405nm處檢測吸光度（參考波長為600—650nm），應(yīng)在加入終止液后60分鐘內(nèi)讀數(shù) 結(jié)果計算 質(zhì)量控制 該實驗結(jié)果只有在按照說明書操作才有效。此外，使用者必須嚴(yán)格按照GLP規(guī)范或者其他適合的準(zhǔn)則/法律。所有的試劑盒質(zhì)控品必須在標(biāo)簽和QC證書的可接受范圍內(nèi)。如果不符合該條件，則實驗無效并需要重做。每個實驗室應(yīng)使用已知的樣本作為進一步的質(zhì)控。建議進行適當(dāng)?shù)馁|(zhì)量評價試驗。 如果有任何的偏差，以下的技術(shù)問題應(yīng)給予證實：試劑的有效期、保存條件、移液器、設(shè)備、溫育條件和洗滌方法。 定性評價 標(biāo)準(zhǔn)品B（臨界標(biāo)準(zhǔn)品）的吸光度為臨界值（CO）。通過樣本的平均吸光度比臨界值可以計算臨界指數(shù)（COI），樣本的吸光度更高的為陽性，樣本吸光度低的為陰性。 例如： 臨界值（標(biāo)準(zhǔn)品B吸光度）=0.23 樣本OD值=0.7 臨界指數(shù)（COI）：0.70/0.23=3.04。樣本應(yīng)被認(rèn)為是陽性。 定量評價 以標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為Y軸（線性），相應(yīng)的濃度為X軸（對數(shù)）在半對數(shù)坐標(biāo)紙或者自動分析軟件上作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，使用三次樣條函數(shù)、4參數(shù)或者Logit-Log可以得到良好的擬合度。 計算標(biāo)準(zhǔn)曲線應(yīng)該使用每個標(biāo)準(zhǔn)品的OD值（在重復(fù)檢測中一個明顯的異常值應(yīng)忽略而采用一個更可靠的單值）。 科潤達(dá)生物還提供更多其他自身免疫類的試劑盒，歡迎咨詢了解。 想了解更多產(chǎn)品信息，歡迎咨詢我們獲取資料。 |
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