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人TNF-β檢測試劑盒（ELISA）

ELISA操作孵育過程常見問題及解答：

1） 孵育時未貼封片或加蓋，使標本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗*；

2） 孵育時間人為延長，導致非特異性結合緊附于反應孔周圍，難以清洗*。

3）孵育溫度未按照說明書要求進行，溫度過高或過低；
解決辦法：
1） 貼封片或加蓋；

2） 按說明步驟嚴格控制操作時間和孵育溫度。

通用名稱：人TNF-β檢測試劑盒（ELISA法）
英文名稱：RayBio® Human TNF-alphβ ELISA Kit
產品貨號：TNF-b
產品規(guī)格：96T
檢測樣本：血清、血漿、細胞上清液
公司品牌：美國RayBio
儲存條件：-20℃
檢測方法：ELISA方法
預期用途：定量測定人血清血漿和細胞培養(yǎng)上清液中的TNF-β的含量
參考價格：詢價
供應商家：深圳市科潤達生物工程有限公司

人TNF-βELISA試劑盒預期用途
RayBio®人TNF-β細胞因子酶免試劑盒采用體外酶聯(lián)免疫吸附測定法，定量測定人血清（正常血清和血漿中的人TNF-β濃度低，在該測定中可能無法檢測到），血漿和細胞培養(yǎng)上清液中的TNF-β的含量。

人TNF-β檢測試劑盒組成成分
●TNF-β酶標板（項目A）——12*8=96孔，包被有抗人TNF-β抗體——4℃ 1個月
●濃縮洗滌液（20x）（項目B）——20x濃縮溶液 25ml——4℃ 1個月
●標準蛋白（項目C）——2瓶人類TNF-β。1個小瓶就夠配制每個一式兩份的標準品。—— -80℃1個月
●檢測抗體TNF-β（項目F）——2瓶生物素化的抗人TNF-α。
●每個小瓶足以測定微板的一半?！?℃ 5天
●濃縮HRP-鏈霉親和素（項目G）——200μl 700X濃縮HRP綴合鏈霉親和素——不能保存和重新使用
●一步法TMB底物（項目H）——TMB溶液12ml——N/A
●終止液（項目I）——8ml 0.2M硫酸——N/A
●測定稀釋劑A（項目D）——30ml稀釋緩沖液，0.09％疊氮化吶防腐劑?！狽/A
●測定稀釋劑B（項目E）——15ml 5X濃縮液——4℃ 1個月
●將未使用的板條重新裝回到含有干燥劑包的袋中，沿著整個邊緣重新密封。

人TNF-β檢測試劑盒檢測原理
人TNF-β細胞因子酶免試劑盒使用包被有人TNF-β特異性抗體的96孔酶標板，標準品和樣品被加入到孔中，樣品中存在的TNF-β通過固相的抗體與孔結合。洗滌后加入生物素化的抗人TNF-β抗體。 洗去未結合的生物素化抗體后，將HRP-標記的鏈霉素加入到到孔中。 再次洗滌板孔，向孔中加入TMB底物溶液，底物顯色與所結合的TNF-β量成比例。 加入終止液顏色從藍色變?yōu)辄S色，并且在450nm處測量顏色的吸光度值。

人TNF-β檢測試劑盒存儲
人TNF-β檢測試劑盒可在-20°C下保存，從裝運之日起存放可長達1年。 避免反復凍融循環(huán)。 試劑盒可以在4℃下儲存長達6個月。 對于更長時間儲存時，建議儲存在-80°C。

人TNF-β檢測所需材料（試劑盒內不提供）
●能夠測量450 nm處吸光度的酶標儀。
●提供2μl至1 ml體積的精密移液管。
●可調1-25毫升移液器用于試劑制備。
●100毫升和1升刻度量筒。
●吸水紙。
●蒸餾水或去離子水。
●雙對數(shù)做圖紙或計算機和軟件進行ELISA數(shù)據(jù)分析。
●準備標準品或樣品稀釋液的管子。

人TNF-β檢測試劑盒檢測步驟
●使用前將所有試劑和樣品置于室溫（18 - 25oC）。建議所有標準和樣品至少重復一次。
●根據(jù)您的實驗標記可拆卸的8孔條。
●分別加入樣品和每個標準品100μl（參見試劑制備步驟3）到適當?shù)陌蹇字小Ｉw上蓋子，室溫溫和振蕩孵育2.5小時
●棄去溶液，用1X洗滌液洗滌4次。使用多通道移液器或自動洗板機洗板，每孔加入洗滌緩沖液（300μl）。每個步驟中去除液體對于良好的性能是至關重要的。洗完后，通過吸取或傾析清除任何剩余的洗滌緩沖液。倒置板并用干凈的吸水紙吸干印跡。
●每孔加入100μl1X制備的生物素化抗體（試劑制備步驟6）。在室溫下溫和振蕩孵育1小時。
●棄去溶液。重復洗滌，如步驟4。
●加入100μl制備的鏈霉親和素溶液（見試劑制備步驟7）。在室溫下溫和搖動孵育45分鐘。
●棄去溶液。 重復洗滌，如步驟4。
●向每個孔中加入100μlTMB一步底物試劑（項目H）。在室溫下在黑暗中輕輕振蕩孵育30分鐘。
●向每個孔中加入50μl終止液（項目I）。 立即讀取450 nm處吸光度值。

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