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核酸檢測(cè)為什么不直接唾液檢測(cè)呢?
 不少人可能會(huì)好奇:為什么核酸檢測(cè)不能直接用棉簽蘸唾液來唾液檢測(cè)呢?原因有兩點(diǎn):
  1.唾液里的病毒量少 病毒一般是定植在呼吸道里,隨著呼吸道分泌物向外排出的,因此越靠近咽喉里面,病毒會(huì)分布得越多。唾液中的病毒比咽部表皮上要少,檢測(cè)的敏感度可能會(huì)降低。
  2.唾液需要經(jīng)過液化處理 唾液本身比較黏稠,不能直接拿來檢測(cè),需要先進(jìn)行液化處理。全國每天有大量核酸樣本要檢測(cè),如果每份都要液化,無疑就會(huì)大大增加檢測(cè)時(shí)間。
  目前唾液的檢測(cè)的樣本采集比較方便,處理也比較簡(jiǎn)單,可檢測(cè)的用途也越來越廣了。本文介紹的唾液鐵調(diào)素檢測(cè)試劑盒采用的是ELISA方法,該方法操作簡(jiǎn)單方便,擁有靈敏度高特異性強(qiáng)的特點(diǎn),檢測(cè)時(shí)間短,檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確,目前ELISA方法已經(jīng)在普遍運(yùn)用。
  檢測(cè)原理
  唾液鐵調(diào)素檢測(cè)試劑盒采用的競(jìng)爭(zhēng)法。微量滴定孔用針對(duì)鐵調(diào)素分子抗原位點(diǎn)的單克?。ㄐ∈螅┛贵w包被?;颊邩悠分械膬?nèi)源性鐵調(diào)素與鐵調(diào)素-生物素結(jié)合物(酶結(jié)合物)競(jìng)爭(zhēng)與被包被抗體的結(jié)合。溫育后,洗滌微量滴定板以終止競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)。
  在隨后的溫育中,結(jié)合的生物素分子用鏈霉親和素過氧化物酶(酶復(fù)合物)檢測(cè)。溫育后,將板再次洗滌。添加底物溶液后,顯色的強(qiáng)度與患者樣品中鐵調(diào)素的濃度成反比。
  檢測(cè)步驟
  每次運(yùn)行必須包含一條標(biāo)準(zhǔn)曲線。
  1、在框架固定器中固定所需數(shù)量的微量滴定孔。
  2、用新的一次性吸頭分配100 ?L的每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品,質(zhì)控品和樣品(上清液)到適當(dāng)?shù)目字小?/span>
  3、在每個(gè)孔中分配100 ?L酶聯(lián)物。*混合10秒鐘。在此步驟中進(jìn)行充分混合非常重要。
  4、在室溫下孵育60分鐘。
  5、輕搖孔中的內(nèi)容物。每孔用400 ?L稀釋的洗滌溶液沖洗孔4次(如果使用了平板清洗機(jī))-或-每孔用300 ?L稀釋的洗滌溶液沖洗孔4次以進(jìn)行手動(dòng)洗滌。在吸收紙上劇烈打孔以去除殘留的液滴。重要的提示:正確執(zhí)行洗滌程序會(huì)明顯影響該測(cè)定的靈敏度和精確度!
  6、將100 ?L酶復(fù)合物分配到每個(gè)孔中。
  7、在室溫下孵育30分鐘。
  8、輕搖孔中的內(nèi)容物。每孔用400 ?L稀釋的洗滌溶液沖洗孔4次(如果使用了平板清洗機(jī))-或-每孔用300 ?L稀釋的洗滌溶液沖洗孔4次以進(jìn)行手動(dòng)洗滌。在吸收紙上劇烈打孔以去除殘留的液滴。
  9、向每個(gè)孔中添加100 ?L底物溶液。
  10、在室溫下孵育15分鐘。
  11、通過向每個(gè)孔中添加100 ?L終止液來終止酶促反應(yīng)。
  12、用微量滴定板讀數(shù)器測(cè)定每個(gè)孔在450±10 nm處的吸光度(OD)。建議在添加終止液后10分鐘內(nèi)讀取孔。
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