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人半乳糖缺乏IgA1(Gd-IgAⅠ)試劑盒操作步驟
  人半乳糖缺乏IgA1(Gd-IgAⅠ)試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被人半乳糖缺乏IgA1(Gd-IgA1)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人半乳糖缺乏IgA1(Gd-IgA1)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。
 
  人半乳糖缺乏IgA1(Gd-IgAⅠ)試劑盒操作步驟:
 
  1、從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
 
  2、設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;
 
  3、樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。
 
  4、除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
 
  5、棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。
 
  6、每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
 
  7、每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。
 
  實驗結果計算:
 
  以所測標準品的OD值為橫坐標,標準品的濃度值為縱坐標,在坐標紙上或用相關軟件繪制標準曲線,并得到直線回歸方程,將樣品的OD值代入方程,計算出樣品的濃度。
 
  人半乳糖缺乏IgA1(Gd-IgAⅠ)試劑盒性能:
 
  1、檢測范圍:62.5U/mL–2000U/mL。
 
  2、靈敏度:檢測濃度小于10U/mL。
 
  3、特異性:不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
 
  4、重復性:板內(nèi)變異系數(shù)小于10%,板間變異系數(shù)小于15%。
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