ELISA指將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙烯等固相載體上，利用抗原抗體結(jié)合專(zhuān)一性進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測(cè)方法。
寵物獸醫(yī)ELISA檢測(cè)基本原理：
①使抗原或抗體結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性。
②使抗原或抗體與某種酶連接成酶標(biāo)抗原或抗體，這種酶標(biāo)抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。
③在測(cè)定時(shí)，把受檢標(biāo)本（測(cè)定其中的抗體或抗原）和酶標(biāo)抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與其他物質(zhì)分開(kāi)，后結(jié)合在固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。
?、芗尤朊阜磻?yīng)的底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)顏色反應(yīng)的深淺有無(wú)定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，故可很大地放大反應(yīng)效果，從而使測(cè)定方法達(dá)到很高的敏感度。
雙抗夾心法
夾心法常用于檢測(cè)大分子抗原，一般的操作步驟為：
①將具有專(zhuān)一性的抗體固著于塑膠孔盤(pán)上，完成后洗去多余抗體；
?、诩尤氪郎y(cè)檢體，檢體中若含有待測(cè)的抗原，則其會(huì)與塑膠孔盤(pán)上的抗體進(jìn)行專(zhuān)一性鍵結(jié)；
?、巯慈ザ嘤啻郎y(cè)檢體，加入另一種對(duì)抗原專(zhuān)一的一次抗體，與待測(cè)抗原進(jìn)行鍵結(jié)；
④洗去多余未鍵結(jié)一次抗體，加入帶有酶的二次抗體，與一次抗體鍵結(jié)；
?、菹慈ザ嘤辔存I結(jié)二次抗體，加入酶底物使酵素呈色，以肉眼或儀器讀取呈色結(jié)果。
寵物獸醫(yī)ELISA檢測(cè)間接法
間接法常用于檢測(cè)抗體，一般的操作步驟為：
?、賹⒁阎目乖讨谒苣z孔盤(pán)上，完成后洗去多余的抗原。
②加入待測(cè)檢體，檢體中若含有待測(cè)的一次抗體，則其會(huì)與塑膠孔盤(pán)上的抗原進(jìn)行專(zhuān)一性鍵結(jié)。
③洗去多余待測(cè)檢體，加入帶有酶的二次抗體，與待測(cè)的一次抗體鍵結(jié)。
?、芟慈ザ嘤辔存I結(jié)二次抗體，加入酶底物使酶呈色，藉儀器（ELISA reader）測(cè)定塑膠盤(pán)中的吸光值（OD值），以評(píng)估有色終產(chǎn)物的含量即可測(cè)量待測(cè)抗體的含量。
競(jìng)爭(zhēng)法
競(jìng)爭(zhēng)法是一種較少用到的ELISA檢測(cè)機(jī)制，一般用于檢測(cè)小分子抗原，其操作步驟為：
①將具有專(zhuān)一性的抗體固著于塑膠孔盤(pán)上，完成后洗去多余抗體；
?、诩尤氪郎y(cè)檢體，使檢體中的待測(cè)抗原與塑膠孔盤(pán)上的抗體進(jìn)行專(zhuān)一性鍵結(jié)；
?、奂尤霂в忻傅目乖?，此抗原也可與塑膠孔盤(pán)上的抗體進(jìn)行專(zhuān)一性鍵結(jié)，由于塑膠孔盤(pán)上固著的抗體數(shù)量有限，因此當(dāng)檢體中抗原的量越多，則帶有酶的抗原可鍵結(jié)的固著抗體就越少，亦即，兩種抗原皆競(jìng)相與塑膠孔盤(pán)上抗體鍵結(jié)，即所謂競(jìng)爭(zhēng)法之由來(lái)。
④洗去檢體與帶有酶的抗原，加入酶底物使酶呈色，當(dāng)檢體中抗原量越多，代表塑膠孔盤(pán)內(nèi)留下之帶有酶的抗原越少，顯色也就越淺。
注：當(dāng)需要偵測(cè)無(wú)法獲得兩種以上單一性抗體的抗原，或是不易得到足夠的純化抗體以固著于孔盤(pán)上時(shí)，一般會(huì)考慮使用競(jìng)爭(zhēng)法寵物獸醫(yī)ELISA檢測(cè)。
